動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的必需條件
在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中，最困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。
⑴血清：動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生長(zhǎng)必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。在這里，血清等于是動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營(yíng)養(yǎng)液。
⑵支持物：大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞有貼壁生長(zhǎng)的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，塑料等作為支持物。
⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件。
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟
注：所有步驟應(yīng)在無菌無毒的超凈工作臺(tái)進(jìn)行。胰蛋白酶處理時(shí)間不宜過長(zhǎng)。
取離體的動(dòng)物組織，器官或細(xì)胞，剪碎并加入胰蛋白酶分解成單個(gè)細(xì)胞，配置形成細(xì)胞懸液。
制備動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液體培養(yǎng)基（需加入血清，保證無菌無毒），將細(xì)胞接種至培養(yǎng)基，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行初代培養(yǎng)。
當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定程度，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象時(shí)，用胰蛋白酶再次處理，并用細(xì)胞懸液吹打貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞。進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
依照計(jì)數(shù)結(jié)果，分瓶培養(yǎng)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)。獲得細(xì)胞系或細(xì)胞株。
